TÉCNICA HISTOLÓGICA

La técnica histológica es una serie secuencial de pasos a través de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

PASOS

A) Obtención:
Consiste en la provisión del material que se desea estudiar por medio del microscopio. El método seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material.
Los medios más usuales son:
Biopsia: extracción de pequeños fragmentos de tejido de un organismo vivo.
Autopsia: examen de los órganos luego de la muerte.
Resección quirúrgica: extirpación de órganos completos o de grandes partes de los mismos, a través de un procedimiento quirúrgico.

B) Fijación:
Método para la preservación de la morfología y la composición química de las células y los tejidos. Consiste en producir la muerte de las células, de manera tal que las estructuras que poseían éstas en el estado viviente se conserven con un mínimo de modificaciones, a lo largo del tiempo y de los subsiguientes pasos de la técnica. Debe realizarse inmediatamente de extraer las células del organismo.
Propiedades de los fijadores:
- Producen una rápida muerte celular, evitando la autolisis.
- Preservan la morfología celular y tisular.
- Preservan la composición química.
- Penetran a los tejidos con relativa rapidez.
- Facilitan la coloración posterior.
- Inhiben el crecimiento microbiano y por lo tanto la putrefacción.
- Aumentan la consistencia de los tejidos.
- Algunos de ellos colorean sustancias de los tejidos.
Efectos indeseables de algunos fijadores:
- Retraen los tejidos.
- Precipitan en forma de cristales.
- Endurecen demasiado las muestras.
- Poseen olor desagradable e irritan la piel y las mucosas.
- Producen alteraciones importantes a nivel molecular.
- Producen alteraciones importantes a nivel ultraestructural.

EL FORMOL
Es el fijador histológico universal, sobre todo el diluido en agua: FORMOL 10%.
Ventajas:
Tiene una gran versatilidad frente a los diferentes tejidos, extraordinario poder de penetración (pudiendo fijarse con el piezas relativamente grandes) es de fácil utilización y económico.




Inconvenientes:
Su velocidad de penetración y de fijación son lentas, demorando para ello no menos de 8 horas y siendo lo óptimo entre 12 y 24 horas.
Produce un fenómeno a lo largo del tiempo que va deteriorando las estructuras moleculares de los tejidos (Formación de puentes cruzados).
Si la fijación se prolonga a lo largo del tiempo más allá de las 36 horas comienzan los fenómenos de sobrefijación que son progresivamente irreversibles.

Es importante recordar:
- En caso de no saber cual es el fijador ideal para una determinada muestra de tejido, debe utilizarse formol.
- Nunca debe emplearse el formol puro, sino diluido al 10 %.
- El tiempo de fijación debe oscilar entre 12 y 36 horas.
- Siempre debe emplearse abundante fijador (unas 10 veces mayor volumen que la pieza a fijar).

C) Inclusión:
Para la obtención de cortes finos es un requisito indispensable que el tejido haya sido previamente endurecido hasta un cierto punto, cuanto mayor sea la firmeza del tejido, tanto más delgada resulta el corte histológico. Con el fin de endurecer los tejidos existen dos métodos principales:
- Congelación: Se utiliza fundamentalmente durante una cirugía para obtener un diagnóstico intraopetatorio ya que es más rápido.
- Inclusión: El procedimiento es lento pero los preparados son de gran calidad. El tejido se impregna en un material que le confiere una consistencia adecuada para el corte. El material que se suele utilizar es la PARAFINA para microscopio óptico y la RESINAS EPOXI para el microscopio electrónico.

D) Corte:
Los tejidos deben ser cortados en láminas delgadas para posibilitar su observación con el microscopio, los instrumentos utilizados para la obtención de cortes son los micrótomos. El ancho de corte suele variar entre 5 y 8 micrones. Los cortes se secan y luego se los pasa por solventes intermediarios como el xileno, el benceno o el tolueno y se los hidratada en alcoholes de concentración decreciente hasta llevarlos al agua destilada para su posterior coloración.

E) Tinción:
La falta de colores y contrastes en las estructuras celulares no permite visualizar prácticamente ningún componente. La tinción o coloración se efectúa con dos propósitos:
- La coloración rutinaria trata de posibilitar el estudio morfológico o estructural, sin que se pueda obtener mayor información sobre la naturaleza química de las estructuras observadas.
- La histoquímica es el conjunto de técnicas de coloración destinadas a visualizar sustancias específicas en los tejidos, utiliza métodos tendientes a identificar a un determinado tipo de molécula o sustancia, visualizándola microscópicamente.
La mayoría de los colorantes citológicos o histológicos son de naturaleza orgánica y aromática. Se reconocen dos tipos de colorantes: básicos y ácidos.
La coloración rutinaria más empleada es la combinación de un colorante básico (HEMATOXILINA) y uno ácido (EOSINA). Característicamente la hematoxilina colorea los núcleos y el retículo endoplasmático rugoso y la eosina colorea los citoplasmas y la mayoría de los elementos fibrilares del espacio intercelular.